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重楼提取物抗骨肉瘤作用及机制研究

分类:(二) 发表时间:2019-08-18

骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤, 恶性程度高, 早期易发生肺转移, 5年整体生存率低于30%[1], 伴有肺转移者的远期生存率甚至仅有19%[2]。近年出现的新辅助化疗和根治性切除手术仍未
 
骨肉瘤是最常见的原发性恶性骨肿瘤, 恶性程度高, 早期易发生肺转移, 5年整体生存率低于30%[1], 伴有肺转移者的远期生存率甚至仅有19%[2]。近年出现的新辅助化疗和根治性切除手术仍未达到满意的疗效, 不仅副反应严重, 还会发生化疗耐药。因此, 寻找新疗法仍有重要意义。血管生成拟态 (vasculogenic mimicry, VM) 是一种全新的肿瘤微循环模式, 它不同于经典的内皮依赖性肿瘤血管, 而是高侵袭性肿瘤细胞为满足自身营养和代谢需求而形成的功能性血流通道[3]。由于缺乏内皮, VM壁层的肿瘤细胞直接暴露于血循环, 极易发生远处转移[4]。有研究发现, VM存在于人类骨肉瘤中, 并与不良预后密切相关[5]。因此, VM可作为骨肉瘤临床治疗的潜在靶标。
 
 
重楼药用历史悠久, 首见于《神农本草经》, 《中国药典》2015年版收载的重楼为百合科植物云南重楼Paris polyphylla Smith var.yunnanensis (Franch.) Hand.-Mazz.或七叶一枝花P.polyphylla Smith var.chinensis (Franch.) Hara的干燥根茎。其味苦, 微寒, 有小毒, 归肝经;具有清热解毒、消肿止痛、凉肝定惊的功效, 用于疗疮痈肿、蛇虫咬伤、跌扑伤痛、惊风抽搐等症, 是著名中成药云南白药和季德胜蛇药片的主要组成药物。现代药理研究表明, 重楼对多种肿瘤均有很强的抗肿瘤作用[6]。然而, 重楼对骨肉瘤细胞增殖和VM的影响尚不明确。本研究采用侵袭性高并有VM形成能力的骨肉瘤细胞株143B, 观察重楼醇提物 (Paris polyphylla ethanol extract, PPEE) 对143B细胞体内外生长及VM的抑制作用, 并探讨其可能的作用机制, 为骨肉瘤治疗新药研发提供理论依据。
 
1 材料
 
1.1 试剂与药材
 
 
DMEM培养基、DMEM/F12培养基、胎牛血清 (FBS) 、青-链霉素购自美国Gibco公司;MTT、牛血清白蛋白 (BSA) 、Hoechst 33342购自美国Sigma公司;基质胶 (Matrigel) 购于美国BD公司;小鼠单克隆抗体Bax、Bcl-2、Caspase-8、Caspase-9、cleaved Caspase-8、cleaved Caspase-9、cyclin B1、CD31、增殖细胞核抗原 (PCNA) 均购自美国Santa Cruz公司;兔单克隆抗体cleaved PARP、FAK及兔多克隆抗体Caspase-3、cleaved Caspase-3、MMP-2、MMP-9购自美国Abcam公司;兔单克隆抗体phospho-CDK1、phospho-Cdc25C、phospho-Chk2购自美国CTS公司;兔多克隆抗体Mig-7购自美国Bioss公司;丙氨酸氨基转移酶 (ALT) 、天冬氨酸氨基转移酶 (AST) 、血尿素氮 (BUN) 、肌酐 (Cr) 检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所;顺铂注射液 (齐鲁制药有限公司, 批号EA4A8001A) ;重楼药材购自南京合力制药有限公司, 经江苏省中医药研究院钱士辉教授鉴定为百合科植物云南重楼P.polyphylla var.yunnanensis (Franch.) Hand.-Mazz.的干燥根茎, 标本 (标本号20150027) 存放于江苏省中医药研究院中药质量与代谢组研究室。
 
1.2 细胞与动物
 
 
人骨肉瘤细胞株143B、MG-63、U2-OS及人成骨细胞hFOB1.19均购自美国ATCC公司;6~8周龄BALB/C裸鼠购自上海灵畅生物科技有限公司, 许可证号SCXK (沪) 2008-0113, 动物实验取得东南大学附属中大医院伦理委员会批准。
 
1.3 仪器
 
 
AC2-4S1二级生物安全柜 (新加坡ESCO公司) ;HERAcell 150i细胞培养箱、Milli-Q超纯水系统 (美国Millipore公司) ;FACSCanto流式细胞仪 (美国BD Bioscience公司) Allegra 64R控温离心机 (美国Beckman公司) ;MS 205DU精密电子天平 (瑞士Mettler-Tolerdo公司) ;Roche Modular DP全自动化生化仪 (美国Roche公司) ;HFU 486 Basic超低温冰箱 (美国Thermo Electron公司) ;164-5050Western电泳仪 (美国Bio-Rad公司) ;Axio vert A1倒置荧光显微镜 (德国Zeiss公司) 。
 
2 方法
 
2.1 PPEE的制备
 
 
称取1 kg重楼干燥根茎粗粉, 用10倍量的80%乙醇加热回流提取3次, 每次2 h, 合并滤液, 减压浓缩得到重楼醇提物 (PPEE, 194.10 g) , 按《中国药典》2015年版一部重楼药材含量测定项下方法[7], 测得PPEE中重楼皂苷I、II、VI、VII质量分数分别为0.396%、0.126%、0.131%、0.186%。细胞实验使用时PPEE溶于二甲基亚砜 (DMSO) 稀释至质量浓度为1 mg/mL, 0.22μm超滤除菌, -20℃储存, 使用时用培养基稀释。
 
2.2 体外实验
 
2.2.1 细胞培养
 
 
143B、MG-63、U2-OS细胞用含10%FBS的DEME培养基 (含青-链霉素各100 U/mL) 于37℃、5%CO2培养箱培养;h FOB1.19细胞用含10%FBS的DMEM/F12培养基 (含青-链霉素各100U/m L) 中于34℃、5%CO2培养箱培养。
 
2.2.2 MTT实验检测细胞增殖
 
 
分别取对数生长期的上述细胞, 以5×103个/孔的密度接种在96孔板中, 设空白组 (加入等体积细胞培养液) 、对照组 (DMSO) 和实验组 (加入2.5~100μg/mL PPEE) , 每组6个复孔, 分别培养24、48、72 h, 每孔加入MTT 20μL, 继续培养4 h。弃去上清液, 加入150μL DMSO后使用酶标仪检测570 nm处吸光度 (A) 值, 实验重复3次, 计算细胞增殖抑制率和半数抑制浓度 (IC50) 。
 
 
 
 
2.2.3 Hoechst染色检测细胞凋亡
 
 
143B细胞以2×105个/孔接种于6孔板内, 待贴壁后加入不同质量浓度 (15、30、60μg/mL) PPEE作用24 h, PBS漂洗3次, 用Hoechst 33342 (1μg/mL) 室温下避光孵育15 min。紫外光激发, Zeiss荧光显微镜观察 (×400) 。
 
2.2.4 流式细胞仪检测细胞周期
 
 
143B细胞以1×106个/孔接种于6孔板内, 待贴壁后加入不同质量浓度 (15、30、60μg/mL) PPEE作用24 h, 收集细胞, 加入预冷的70%乙醇, 4℃固定过夜。次日收集细胞, 加入PI, 4℃避光孵育30 min, 将处理好的细胞用FACSCantoTM流式细胞仪检测, 结果用Modifit软件分析。
 
2.2.5 流式细胞仪检测细胞凋亡
 
 
143B细胞以1×106个/孔接种于6孔板内, 待贴壁后加入不同质量浓度 (15、30、60μg/mL) PPEE作用24 h, 收集细胞, 加入5μL Annexin V-FITC染色, 再加入5μL PI, 室温下避光反应15 min, 将处理好的细胞用流式细胞仪检测。
 
2.2.6 体外管腔形成实验
 
 
取200μL预先于4℃过夜融化的Matrigel, 加入24孔板, 置培养箱内30min使Matrigel凝固。制备143B细胞悬液, 并加入不同质量浓度 (2.5、5.0、7.5μg/mL) 的PPEE, 调整细胞数为6×105个/mL, 并接种到Matrigel上, 继续培养24 h。显微镜下随机选取5个视野拍照 (×200) , 计数每个视野的管状结构个数, 取平均值。实验重复3次。
 
2.2.7 Western blotting检测相关蛋白表达
 
 
取不同质量浓度 (15、30、60μg/mL或2.5、5.0、7.5μg/mL) 的PPEE处理24 h后的143B细胞, 用RIPA裂解液置于冰上裂解10 min, BCA检测蛋白质量浓度, 按每孔50μg蛋白量进行10%SDS-PAGE电泳, 电泳后转膜至PVDF膜。封闭液封闭2 h, 孵育不同的一抗4℃过夜, TBST液洗涤3次, 加入辣根过氧化物酶标记的二抗, 在室温下孵育1 h。化学发光法显影。IPP软件测定条带灰度值并计算蛋白相对表达量。
 
2.3 体内实验
 
2.3.1 143B荷瘤裸鼠模型制备及给药
 
 
对数生长期的143B细胞以5×107/m L重悬于PBS中, 每只200μL接种至裸鼠右侧腋窝皮下, 接种后第8天肿瘤体积达到100 mm3。将裸鼠随机分为5组, 分别为溶剂对照组 (0.5%CMC-Na) , 50、100、200 mg/kg PPEE组及顺铂组 (3 mg/kg) , 每组6只裸鼠。溶剂对照组和PPEE各剂量组每天ig给药1次, 顺铂组按3 mg/kg每4天ip给药1次[8], 各组给药4周。每隔3天记录裸鼠体质量和肿瘤体积 (V, V=L×W2×0.5, L为肿瘤长度, W为肿瘤宽度) 。裸鼠存活时间为从接种开始直至裸鼠死亡的时间。
 
2.3.2 143B荷瘤裸鼠相关生化指标检测
 
 
在另1组实验中, 30只荷瘤裸鼠用同样方法造模并给药处理。治疗4周后, 裸鼠眼眶取血, 自动细胞计数器检测全血白细胞 (WBC) 、红细胞 (RBC) 、血红蛋白 (HGB) 和血小板计数 (PLT) 。使用Roche P800自动生化分析仪测定血清ALT、AST、BUN和Cr水平。
 
2.3.3 PCNA免疫组化和TUNEL检测
 
 
“2.3.2”项下荷瘤裸鼠取血后剥离皮下肿瘤, 称质量, 用4%多聚甲醛固定。肿瘤组织石蜡包埋、切片, 经常规脱蜡、水化, H2O2消除内源性过氧化物酶, 微波抗原修复, 血清封闭, 滴加PCNA抗体孵育, 随后用辣根过氧化物酶标记的二抗孵育DAB显色后, 苏木素复染, 显微镜下观察 (×200) 。按TUNEL检测试剂盒说明书操作, 检测肿瘤组织中的细胞凋亡情况。显微镜下观察 (×200) , 并随机选取10个非重叠视野, 计数每个视野内的PCNA和TUNEL阳性细胞数和细胞总数。
 
2.3.4 CD31-过碘酸雪夫氏 (periodic acid-Schiff, PAS) 双重染色检测VM
 
 
免疫组化常规染完CD31后, 滴加0.5%过碘酸溶液孵育15 min, 然后加入雪夫试剂。苏木精复染, 脱水后封固, 显微镜下观察 (×400) 。VM判断标准:VM为肿瘤细胞围成的血管样结构, CD31染色阴性, PAS染色阳性, 并选择有红细胞的管腔。VM定量标准:显微镜下随机选取5个视野计数VM密度 (VMD) , 取平均值。
 
2.3.5 组织学检查
 
 
多聚甲醛固定的肿瘤组织用石蜡包埋, 连续切片, 苏木精-伊红 (HE) 染色, 常规梯度酒精脱水, 二甲苯透明, 中性树脂封片。显微镜下观察拍照。
 
2.4 统计学分析
 
 
采用SPSS 17.0软件进行统计学处理, 数据以表示, 两组均数比较采用Students’t检验, 正态性及方差采用齐性检验, 多组间比较采用单因素方差分析, 生存分析采用Kaplan-Meier法。
 
3 结果
 
3.1 PPEE对人骨肉瘤细胞增殖的影响
 
 
PPEE对人骨肉瘤细胞增殖的抑制作用具有一定的剂量依赖性和时间依赖性 (图1) 。并且PPEE对人成骨细胞h FOB1.19增殖无明显抑制作用 (IC50>200μg/mL) , 表明PPEE对成骨细胞hFOB1.19毒性较小。由于PPEE对143B细胞增殖抑制率最高, 且143B细胞体内外均具有高侵袭、高转移的特性, 因此选取143B细胞进行后续实验。
 
3.2 PPEE对143B细胞凋亡和细胞周期的影响
 
 
Hoechst法染色后, 对照组细胞未见明显凋亡形态, 细胞核呈现均匀、淡蓝色的荧光, 而不同质量浓度PPEE作用细胞后均出现核染色质固缩、核碎裂、凋亡小体及呈现强蓝色荧光等典型凋亡现象 (箭头所示) , 随着PPEE质量浓度的增加, 凋亡现象越明显 (图2) 。
 
 
Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡情况, 结果见图3-A。PPEE可质量浓度依赖性地诱导143B细胞凋亡。流式细胞仪检测细胞周期结果见图3-B, PPEE可质量浓度依赖性地将143B细胞阻滞在G2/M期。
 
图1 PPEE对3种人骨肉瘤细胞及人成骨细胞增殖的影响 (, n=6) Fig.1 Effects of PPEE on proliferation of three human osteosarcoma cells and human osteoblast cells (, n=6)  
图1 PPEE对3种人骨肉瘤细胞及人成骨细胞增殖的影响 (, n=6) Fig.1 Effects of PPEE on proliferation of three human osteosarcoma cells and human osteoblast cells (, n=6)   下载原图
 
 
图2 PPEE对143B细胞凋亡的影响 (Hoechst染色, , n=3) Fig.2 Effect of PPEE on cell apoptosis of 143B cells (Hoechst staining, , n=3)  
图2 PPEE对143B细胞凋亡的影响 (Hoechst染色, , n=3) Fig.2 Effect of PPEE on cell apoptosis of 143B cells (Hoechst staining, , n=3)   下载原图
 
 
箭头所指为凋亡细胞arrow showed apoptotic cells
 
3.3 PPEE对143B细胞体外管腔形成能力的影响
 
 
由于PPEE在2.5~7.5μg/mL作用于143B细胞24 h, 对细胞活性无明显影响 (图4-A) , 因此选择了该浓度和时间范围, 避免PPEE高质量浓度导致的143B细胞数量减少对实验结果产生干扰。Matrigel结果显示, 143B细胞在Matrigel上可形成明显的类血管三维网管状VM结构 (图4-B) , PPEE (2.5、5.0、7.5μg/mL) 使体外VM数量分别减少了18.25%、77.51%、93.21%。
 
3.4 PPEE对细胞凋亡、周期及VM相关蛋白表达的影响
 
 
Western blotting结果显示, 随着PPEE质量浓度的增加, cleaved Caspase-3、8、9及cleaved PARP表达增加, Bax表达增加, Bcl-2表达降低, Bax/Bcl-2增加。细胞周期相关蛋白p-CDK1、p-Cdc25C、p-Chk2表达上调, cyclin B1表达下调。VM相关蛋白FAK、Mig-7、MMP-2、MMP-9表达降低。结果见图5。
 
图3 PPEE对143B细胞凋亡 (A) 和细胞周期 (B) 的影响 (, n=3) Fig.3 Effect of PPEE on cell apoptosis (A) and cell cycle (B) of 143B cells (, n=3)  
图3 PPEE对143B细胞凋亡 (A) 和细胞周期 (B) 的影响 (, n=3) Fig.3 Effect of PPEE on cell apoptosis (A) and cell cycle (B) of 143B cells (, n=3)   下载原图
 
 
与对照组比较:*P<0.05**P<0.01, 图4、5同*P<0.05**P<0.01 vs control group, same as figures 4 and 5
 
3.5 PPEE对143B荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响
 
 
与溶剂对照组比较, PPEE各剂量明显抑制143B移植瘤的生长, 肿瘤质量显著下降, 抑瘤效果具有剂量依赖性, 高剂量PPEE抑瘤作用与阳性药顺铂相当 (图6) , PPEE 50、100、200 mg/kg组抑瘤率分别为44.75%、66.79%、76.26% (图6) 。
 
 
给药期间, 与溶剂对照组相比, PPEE各组裸鼠体质量无明显变化, 顺铂组体质量平均减轻7.43% (图7-A) 。血常规和肝肾功能生化指标结果显示, PPEE各组均无明显改变, 顺铂组WBC、PLT降低了47.57%和34.44%, BUN和Cr提高了52.28%、62.91% (表1) 。存活情况显示 (图7-B) , 溶剂对照组裸鼠平均存活时间最短, PPEE各剂量均能一定程度上延长裸鼠生存期。
 
3.6 PPEE对143B肿瘤组织中PCNA、TUNEL和VM的影响
 
 
HE染色显示, 溶剂对照组肿瘤细胞核大浓染, 异型性明显。PPEE组核质比降低, 核仁部分消失 (图8) 。与溶剂对照组相比, PPEE各组PCNA阳性率显著降低, TUNEL阳性率明显上升 (图8) 。CD31-PAS双染可见溶剂对照组存在CD31染色阴性而PAS染色阳性 (黑色箭头所示) 的VM结构, PPEE各组的VM结构均有破坏, VMD呈现剂量依赖性降低 (图8) 。
 
图4 PPEE对143B细胞活性 (A) 及VM形成 (B) 的影响 (, n=3) Fig.4 Effect of PPEE on cell viability (A) and vasculogenic mimicry formation (B) of 143B cells (, n=3)  
图4 PPEE对143B细胞活性 (A) 及VM形成 (B) 的影响 (, n=3) Fig.4 Effect of PPEE on cell viability (A) and vasculogenic mimicry formation (B) of 143B cells (, n=3)   下载原图
 
 
图5 PPEE对143B细胞周期、凋亡以及VM形成相关蛋白表达的影响 (, n=3) Fig.5 Effects of PPEE on cell cycle-regulated, apoptosis-regulated, and VM formation-related protein of 143B cells (, n=3)  
图5 PPEE对143B细胞周期、凋亡以及VM形成相关蛋白表达的影响 (, n=3) Fig.5 Effects of PPEE on cell cycle-regulated, apoptosis-regulated, and VM formation-related protein of 143B cells (, n=3)   下载原图
 
 
图6 PPEE对143B荷瘤裸鼠体内肿瘤生长的影响 (, n=6) Fig.6 In vivo antitumor effect of PPEE in 143B osteosarcoma xenograft nude mice (, n=6)  
图6 PPEE对143B荷瘤裸鼠体内肿瘤生长的影响 (, n=6) Fig.6 In vivo antitumor effect of PPEE in 143B osteosarcoma xenograft nude mice (, n=6)   下载原图
 
 
与对照组比较:#P<0.05##P<0.01, 表1和图8同#P<0.05##P<0.01 vs control group, same as table 1 and figure 8
 
图7 PPEE对143B荷瘤裸鼠体质量和生存期的影响 (, n=6) Fig.7 Effects of PPEE on body weight and survival time of 143B osteosarcoma xenograft nude mice (, n=6)  
图7 PPEE对143B荷瘤裸鼠体质量和生存期的影响 (, n=6) Fig.7 Effects of PPEE on body weight and survival time of 143B osteosarcoma xenograft nude mice (, n=6)   下载原图
 
 
 
表1 PPEE对143B荷瘤裸鼠血常规和肝肾生化指标的影响 (, n=6) Table 1 Effects of PPEE on haematological parameters and biochemical indices of liver and kidney function in 143B tumor-bearing nude mice (, n=6)     下载原表 
表1 PPEE对143B荷瘤裸鼠血常规和肝肾生化指标的影响 (, n=6) Table 1 Effects of PPEE on haematological parameters and biochemical indices of liver and kidney function in 143B tumor-bearing nude mice (, n=6)  
图8 PPEE对143B肿瘤组织中PCNA、TUNEL和VM的影响 (, n=6) Fig.8 Effects of PPEE on PCNA, TUNEL, and VM in 143B osteosarcoma xenograft (, n=6)  
图8 PPEE对143B肿瘤组织中PCNA、TUNEL和VM的影响 (, n=6) Fig.8 Effects of PPEE on PCNA, TUNEL, and VM in 143B osteosarcoma xenograft (, n=6)   下载原图
 
 
4 讨论
 
 
本研究发现PPEE可以显著抑制体外骨肉瘤细胞增殖, 却对成骨细胞的增殖影响较小, 这意味着PPEE的临床应用可能相对安全。细胞周期调控异常是肿瘤细胞增殖的重要环节[9], 流式细胞仪结果显示PPEE可阻滞143B细胞在G2/M期, 这可能是使143B细胞增殖受到抑制的原因。细胞周期检测点激酶2 (Chk2) 磷酸化可引起Cdc25C磷酸化而失活, 磷酸化的Cdc25C可以阻止CDK1脱磷酸, 使CDK1活性抑制, 从而引起G2/M期关键调控因子CDK1-cyclin B1复合物活性下降, 发生G2/M期阻滞[10]。PPEE一方面使磷酸化Chk2水平升高, 失活Cdc25C、CDK1, 另一方面下调cyclin B1, 使143B细胞阻滞在G2/M期。
 
 
有文献报道, 重楼可诱导多种肿瘤细胞凋亡[11,12]。Hoechst染色可见经PPEE处理的143B细胞出现致密浓染的染色质形态, 流式细胞仪检测进一步证实PPEE可诱导凋亡产生。细胞主要通过线粒体途径和死亡受体途径发生凋亡。线粒体途径中最重要的调控因子是Bcl-2家族蛋白, Bcl-2和Bax分别是该家族最具代表性的抑凋亡和促凋亡蛋白, Bax/Bcl-2值增大引起线粒体损伤, 释放细胞色素C, 募集Caspase-9, 活化Caspase-3, 触发Caspase级联反应[13];外源性途径通过死亡受体与其配体结合, 激活Caspase-8、Caspase-3, 启动Caspase级联反应, 导致细胞凋亡[14]。Western blotting结果显示, PPEE可能通过调控内源性和外源性途径, 引起143B细胞凋亡。
 
 
VM与骨肉瘤生长、侵袭、转移关系密切, 而且与患者预后呈负相关。因此针对VM这种独特的恶性肿瘤血供模式的抗癌疗法己成为新的肿瘤治疗策略[15]。本研究首次报道了143B细胞可在体外matrigel培养环境及裸鼠肿瘤组织中形成VM结构。肿瘤细胞的迁移、重排及细胞外基质结构的重塑是VM形成的必要条件[16], 这使得位于PI3K/AKT信号通路下游的MMP-2和MMP-9都成为VM形成过程中重要的调控分子[17,18,19]。MMP-2和MMP-9可以降解细胞外基质和基底膜结构, 促使肿瘤细胞迁移和侵袭, 由此促进VM的形成[20]。而黏着斑激酶 (FAK) 是一种胞内非受体酪氨酸激酶, 通过调节细胞与细胞外基质黏附及细胞骨架重组等作用参与了恶性肿瘤的侵袭、转移和血管生成[21,22]。迁移诱导蛋白7 (Mig-7) 是一种在多种恶性肿瘤细胞中表达的富含半胱氨酸的蛋白质, 在正常组织中不表达, 在肿瘤VM形成中发挥重要作用[5,23]。既往研究表明, FAK和Mig-7在VM阳性的骨肉瘤患者肿瘤组织中高表达, 使用RNAi沉默FAK可以显著抑制骨肉瘤细胞迁移和侵袭力[22,24]。文献表明, FAK和Mig-7参与激活基质金属蛋白酶, 共同降解层黏连蛋白Ln5γ2链为促迁移片段, 进而促进VM形成[25,26]。本研究发现, PPEE可剂量依赖性地抑制143B细胞体外VM形成, 并能有效抑制MMP-2、MMP-9、FAK和Mig-7等VM相关蛋白的表达, 表明PPEE的抗VM作用可能通过其调控VM信号通路来实现。
 
 
体内实验表明, PPEE可抑制143B裸鼠移植瘤生长, 其中高剂量组抑瘤率与顺铂组相当。PCNA和TUNEL染色证实PPEE可抑制肿瘤细胞增殖, 诱导凋亡, 这与体外结果一致。CD31-PAS双染发现PPEE可破坏骨肉瘤VM形成, 且PPEE可延长裸鼠生存时间。另外, 在给药过程中未出现明显体质量、血液学和肝肾生化指标改变, 说明PPEE具有有效低毒的优点。
 
 
综上所述, 重楼提取物在体内外均具有良好的抗骨肉瘤活性, 其作用机制可能是诱导骨肉瘤细胞凋亡、阻滞细胞周期及破坏VM形成而实现的。本研究为进一步开发安全有效的骨肉瘤治疗药物提供了新的对象和实验依据。
 

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文章名称:重楼提取物抗骨肉瘤作用及机制研究

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